龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn Western—blot 综合性实验在分子诊断学教学中的实施 作者：李江滨 谭荧飞 李育超 来源：《科技创新导报》2012年第36期 摘 要：对Western-blot 综合性实验在分子诊断学教学中的实施情况进行探讨，并分析其教学中存在的问题及提出解决对策，为有关院校开设Western-blot实验教学提供参考。 关键词：Western-blot 综合性实验 教学 中图分类号：G642 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2012）12（c）-0-01 分子诊断学是基础医学与临床医学密切联系的学科，分子诊断学实验课是分子诊断学教学的重要组成，是锻炼学生实验操作能力，分析解决问题能力的重要教学途径之一。蛋白免疫印迹（Western-blot 或 Immunoblot）涉及分子生物学、生物化学和免疫学等综合知识内容，在分子诊断学中开展Western-blot综合性实验，不仅利于提高分子诊断学教学质量，而且能锻炼学生综合技能运用能力。 1 Western-blot 综合性实验在教学中开展的意义 Western-blot实验是根据抗原抗体的特异性结合来检测样品中某种蛋白的方法，现已成为蛋白分析的一种常规技术，在科研和医疗中应用广泛。但本科教学极少开展Western-blot教学，学生对其原理和操作了解较少，缺乏实验机会，相关知识的理解主要停留在理论教学水平。在医学检验专业开设Western-blot g实验课程，已成为一项非常必要的实验教学内容[1]。有助于帮助学生归纳总结相关知识，锻炼学生掌控大型实验的能力，利于提高学生综合素质。 2 Western-blot 综合性实验的原理及实施过程 2.1 Western-blot的检测原理 Western-blot综合性实验一般由SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白印迹和免疫学检测三个部分组成。首先是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。然后是蛋白印迹，把凝胶中已分成条带的蛋白质印迹到硝酸纤维素膜或PVDF膜上。最后是免疫学检测，用特异性的抗体检测出已经印迹在膜上的所要研究的相应抗原。 2.2 Western-blot在分子诊断学教学中的实施过程 根据笔者的教学情况，本综合性实验约需教学时数12～16学时，具体实施过程如下。 龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn ①带教老师讲授Western-blot的实验原理和注意事项。 ②播放Western-blot实验演示视频并示教讲解各步骤的实验原理和注意事项，使学生对Western-blot深入理解和熟悉操作过程。 ③学生分组，以4人为一个小组，合作开展Western-blot实验。 ④Western-blot的基本操作流程包括：⑴提取细胞或组织蛋白、测定含量；⑵SDS-PAGE电泳；⑶电泳转膜；⑷免疫 检测； ⑤各小组学生与带教老师共同讨论分析实验结果。 3 Western-blot 综合性实验的实施效果 3.1 巩固了理论知识、熟悉了实验基本原理和操作过程 Western-blot是一门涉及了分子生物学、生物化学和免疫遗传学等学科的综合性实验，实验原理复杂且难理解。根据往年的教学经验，在Western-blot内容中只开展理论知识的教学，学生理解困难。因此，开展Western-blot的实验教学有助于提高教学质量。 Western-blot是一个综合性实验，不是简单的验证性实验，所以学生每一步的操作都需要认真思考、认真操作。不仅提高学生的学习兴趣，也巩固了学习Western-blot的理论知识，熟悉了实验基本原理和操作过程，加强了学生的自主动手操作 能力。 3.2 利用多媒体与带教老师的双重演示与讲解，加强了学生对实验的理解和熟悉程度 Western-blot是一个复杂性综合性实验，实验步骤繁琐且要求高。如果不熟练实验操作步骤，容易影响实验结果。例如：转移时凝胶与膜之间不能留有气泡，膜和凝胶的位置一定要放正确，同时电源的正负极不能接错[2]。Western-blot的实验操作步骤要求高、步骤多，学生一时不能完全掌握Western-blot其中的重点和要点。在实验课时上利用多媒体资源协助带教老师讲解实验操作，不仅可以帮助学生重复学习和加强记忆，而且学生在课余时间也能够通过观看视频自主复习，对于加深学习有很大的帮助。 3.3 学生在实验过程中注意相互协作，加强了团队合作意识 Western-blot实验所需仪器设备较为昂贵，不太可能每位学生一套器材独立操作，本教学中安排4人1小组，共同完成Western-blot综合性实验。 龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn 由于实验时间较长，步骤较复杂。每组学生分工合作，共同学习和互相监督，遇到问题互相讨论，形成了浓厚的学习氛围。在讨论实验结果时，学生们互相查找资料，共同讨论实验结果，积极查找实验中出现的各种问题的原因，有助于提高学生的综合分析问题能力。 4 剖析Western-blot 综合性实验教学中存在的问题及对策 ①Western-blot综合性实验需要的试剂多、仪器多，价格昂贵，在本科教学中全面开展有难度，难以给每个学生准备一套完整的设备和试剂。各教学单位可根据实验室条件安排几个同学为一组，基本满足Western-blot综合性实验在本科教学的要求。 ②部分试剂有毒性，如丙烯酰胺溶液，NaN3等，易对身体产生毒害[3]，要注意实验室安全。 ③本综合性实验耗时较长，连续操作教学不易安排，可将本实验安排在周六日进行，或将本实验切分成几个小实验，每周进行一个小实验，各教学单位可根据自身教学条件合理安排教学进度。 参考文献 [1] 何秋璟，张春龙，侯敢.医学检验专业开设Western Blotting综合性实验初探[J].卫生职业教育，2007，25（21）： 91-92. [2] 汪渊.蛋白质印迹技术[J].安徽医科大学学报，2004，39（3）：245-247. [3] 胡川笑，邵志华，余小忠，等.3例叠氮化钠中毒病例临床分析[J].环境与职业医学，2011，28（8）：512-513. 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/96c983b704a1b0717fd5dd6a.html