二、 丹皮酚的提取纯化 丹皮酚是中药材丹皮的主要成分之一，含量约为2-3 ％，属挥发性成分，能随水气挥发，实验中采用挥发油提取装置提取丹皮酚。称取丹皮药材约50 g置1 L圆底烧瓶中，加入600 mL水，搭好装置，热回流提取2 h，将收集蒸馏液冷却至室温，冰浴析出结晶。 剪取合适大小滤纸置于布氏漏斗中，先以水润湿，将含结晶溶液以玻璃棒搅拌后缓慢倾入布氏漏斗中，抽滤，以初滤液洗涤结晶，抽干后将结晶转移至已知重量表面皿中，记录结晶重量。 本实验是以超临界二氧化碳对牡丹皮内部成份-牡丹酚(Paeonol)进行萃取条件建立,并以 HPLC 分析牡丹酚含量,最后进行有效成分测试。实验发现当萃取 一定比例的丹参、丹皮的饮片或粉末，以水或任意比例的醇／水或酮／水进行低温加热提取或渗漉或水蒸气蒸馏，提取液经浓缩后，过滤，行大孔吸附树脂，以水洗去杂质后，以任意比例的醇／水洗脱至有效成分完全，减压回收乙醇，干燥得到丹参或丹皮制备物粉末；或馏出液经冷却放置结晶，得丹皮酚粗品 ?牡丹皮是毛莫科植物牡丹Paeonia suffiwic osa Andr.的干燥根皮。其主要有效成分包括丹皮酚、丹皮酚苷、丹皮酚原苷、丹皮酚新苷、芍药苷等。《中国药典》2000年版一部收载的含牡丹皮的成方制剂共32个，占所收载成方制剂的7.0%，可见牡丹皮属于常用中药。但在这32个成方制剂中，仅有9 个经过提取处理（占28.1％），其余23个均为药材粉碎直接使用，这种现状难以满足现代用药的要求，需要对牡丹皮药材进行提取，以“去粗取精”。 因主要有效成分丹皮酚具有升华性，其升华点低（49.5℃），易挥发，故在减少丹皮酚损失的同时尽可能多的提取他成分以保证综合治疗效果，是牡丹皮药材提取应考虑的问题。本实验对牡丹皮的几种提取方法进行了比较，并对其生产实用性进行探讨，以期能为该药材及含该药材复方的提取工艺提供参考。 1 仪器与试药 CO2超临界流体萃取装置（德阳四创科技有限公司），岛津UV-2201型紫外光谱仪，KDM型控温电热套（山东华鲁仪器厂），旋转蒸发仪（上海申顺生物制品有限公司）。 牡丹皮药材购自成都市荷花池药材市场（产地为江苏镇江），经作者鉴定为毛莨科植物牡丹P. suffruticosa的干燥根皮。其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 牡丹皮药材中丹皮酚的含量测定 为计算提取工艺中丹皮酚的转移率，需测定药材中的丹皮酚含量。取牡丹皮粗粉3份，每份约0.2 99精密称定，照《中国药典》2000年版一部牡丹皮药材含量测定项下操作。平行测定3次，结果丹皮酚含量为2.80%（RSD 1.31%），符合药典规定（≥1.2%）。 2.2 牡丹皮的几种提取工艺比较 2.2.1 醇提法 据文献工艺条件略作改进：牡丹皮药材100g,乙醇500mL回流，提取2次，每次1h，提取液合并，滤过测定体积。精密吸取滤液10mL, 药典法测定丹皮酚量，并计算丹皮酚总量。 取上述滤液25mL于已知重量的蒸发皿中，水浴挥干并恒重，计算浸膏总量。同法操作3次，提取物总量、总提取物收率、丹皮酚的提取率及转移率见表1。 提取物总量=浸膏总量＋丹皮酚总量 AIROMA 总提取物收率=——————×100% 药材用量 丹皮酚提取量 丹皮酚的提取率＝——————×100% 药材用量 丹皮酚提取量 丹皮酚的转移率＝————————×100% 丹皮酚含量(2.80%) 表1 各提取方法的提取情况比较 ----------------------- 总提取物 丹皮酚提 丹皮酚转 含酚苷类 提取方法 上率/% 取率/% 移率/% 情况 ----------------------- 醇提法 12.66 2.45 87.5 ＋＋ 蒸馏-煎煮法 13.51 2.26 80.5 ＋ 超临界萃取法 7.28 0.31 11.1 － 煎煮法 7.56 1.15 41.1 + ----------------------- 酚苷类成分鉴别：另取相当于1g药材的滤液，水浴挥干（除去丹皮酚，因丹皮酚遇FeC13乙醇溶液也显紫色），残渣加2mL无水乙醇溶解，滴加2.0% FeCl3乙醇溶液3滴，振摇，溶液变为紫红色，说明提取液中含有酚苷类成分（鞣质遇Fe3+显蓝色或绿色，不干扰鉴别)。 2.2.2 蒸馏-煎煮法 取牡丹皮药材约100g,加15 倍量的水直接蒸馏，收集药材10倍量的馏出液，加 5gNaCl搅拌溶解，冷藏过夜，滤过收集丹皮酚晶体，低温干燥后称重。 蒸馏后的药液滤过备用，药渣再加5倍量的水回流提取1h，滤过，合并滤液并测定体积。取滤液 25mL于已知量的蒸发皿中，水浴挥干并恒重，计算浸膏总量和提取物总量。同法操作3次，总提取物收率、丹皮酚的提取率及转移率见表1。 酚苷类成分鉴别：取相当于6g药材的滤液，正丁醇萃取2次，每次15mL。合并萃取液，取5mL水浴挥干，同2.2.1酚苷类鉴别操作，结果见表1。 2.2.3 C02超临界流体萃取法 牡丹皮药材350g, 用CO2超临界流体萃取装置萃取，条件如下：萃取温度35℃、萃取压力22MPa，解析温度38℃，解析压力22MPa，萃取时间3h，CO2流量27L·h-1。提取物为淡红棕色液体，重25.48g,总收率为7.28%。冷藏后自动分层，上层为淡黄色液体，下层为淡红棕色固体，与文献报道基本相符。 提取物加适量乙醇，使其溶解成均一溶液，转人 100mL量瓶中，乙醇稀释至刻度。精密吸取该溶液 1mL，药典法测定丹皮酚量，计算丹皮酚总量，丹皮酚的提取率及转移率见表1。 酚苷类成分鉴别：取定容后的溶液2mL水浴挥干，同2.2.1酚苷类鉴别的最后操作，结果见表1。 2.2.4 煎煮法 据文献条件略作改进：牡丹皮药材50g,加入到10倍量的沸水中，煎煮5min,滤过，药渣同法再煎煮1次，滤过，合并滤液并测定体积。取滤液50mL，药典法测定其丹皮酚量，计算丹皮酚总量。 提取物总量的测定同蒸馏一煎煮法的提取物总量测定。同法操作3次，总提取物收率、丹皮酚的提取率及转移率见表1。 酚苷类成分鉴别：同蒸馏一煎煮法的酚苷类鉴别。结果见表1。 3 结论与讨论 3.1 药材的提取工艺评价是一件复杂的工作，需要多方面综合考虑。以牡丹皮为例，对很多疾病而言，药材中的丹皮酚是主要有效成分，但其他成分所起的作用如何还不很清楚；对另外的疾病而言，芍药苷又成了主要有效成分，所以仅以某一种或几种成分 对所有的提取工艺进行评价未免有失偏颇，而应根据不同治疗目的进行有针对性的提取，同时又尽可能多地保留各成分，以确保其疗效。 3.2 醇提法提取工艺简单，有效成分提取多，似应为牡丹皮提取的最佳方法，但问题在于醇提液的后处理困难，因丹皮酚的挥发性强，实际生产中难于仅除去乙醇而不损失较多的丹皮酚。为测定回收乙醇损失的丹皮酚，进行了试验。取上述醇提液200 mL，置500mL圆底烧瓶中，用旋转蒸发仪减压回收乙醇，温度45℃，浓缩至相对密度为1.10g·mL-1 (40℃）。取5mL浓缩物，药典法测定其丹皮酚量，结果表明丹皮酚损失率为41.3%。故醇提法不适用于牡丹皮的提取。 3.3 蒸馏-煎煮法是指先蒸馏提取挥发性成分，药渣再加水提取的方法，适用于含挥发性成分药材的提取。丹皮酚随水馏出后，在冷藏状态下大量析出，滤过干燥即可用于成型，保存方便且转移率较高；水提液经醇沉除杂后，也较易成型。蒸馏煎煮法丹皮酚及总提取物收率均较高，兼顾了多种成分的提取，工艺简便，是牡丹皮提取的一种切实可行的方法。 3.4 实验室最佳工艺蒸馏丹皮酚的时间为6h，中试时为了充分提取丹皮酚，将时间延长为3.5h。为考察提取物的热稳定性，对蒸馏得到的丹皮酚用药典法及HPLC峰面积归一化法测定其纯度，结果均大于99％；水提液部分以芍药苷为指标进行了TLC 鉴别，在提取物中可检出芍药苷。说明在提取时间内，丹皮酚及苷类成分的稳定性不受影响。 3.5 在蒸馏-煎煮法馏出液中加入药材量5%的 NaCl，可以促使丹皮酚更多地从馏出液中析出。文献报道是采用重蒸馏法，即馏出液收集晶体后，滤液加入药材量5％的NaCl再蒸馏。重复该方法，丹皮酚总提取率为2.20%，略低于改进后的方法，且在馏出液中直接加入NaCl操作更简单，因此采用改进后的方法。 3.6 CO2超临界流体萃取法提取的丹皮酚量少，远低于文献报道值，但该方法能萃取出大量脂溶性成分，加上萃取温度低、提取分离可一次完成，具有其鲜明的特点。因CO2是非极性物质而酚苷类成分极性较大，故未能将该类萃取出来，这也是导致总提取物收率较低的一个原因。为提高丹皮酚及酚苷类成分的收率，并保持本方法的提取特点，可考虑进一步优化提取条件并加入夹带剂，这方面的工作还有待深人研究。 3.7 煎煮法提取含牡丹皮的中药复方时，牡丹皮药材后下煎煮5～10min，药液直接使用。该方法优点在于工艺十分简便，但丹皮酚转移率低（41.1％），且由于煎煮时间短，苷类成分未能有效煎出，若延长煎煮时间则丹皮酚损失更严重，故煎煮法不适用于牡丹皮的提取，不过在患者煎服传统复方汤剂时仍不失为一种简便的方法。 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/c327baf153e2524de518964bcf84b9d528ea2c34.html