根据目的序列设计 3-4 靶位点 构建表达目的基因质粒, 根据靶点序列覆盖位置, 选择构建表达质粒 转染细胞 按照设计靶点序列,构建 3-4 个病毒质粒 293T 工具细胞 分 别 导 入 工 具 细 胞 进 行 Westernblot 筛靶，选取最有效的靶点序列 表达目的基因选择部分基 因序列的 293T 筛靶工具细胞 获得有效靶点序列（质粒水平） 目的序列病毒大包装 在目的细胞中做 Westerblot 和 Realtime 内源验证靶点的有效性 带感染细胞制作，混合克隆细胞 构建目的基因全部序列到病毒载体 把病毒质粒导入 293T 细胞中检测基 因表达情况。这包括有荧光表达检测，Westernblot 检测，确定基因确 实表达 病毒小包装 进行 qPCR 滴度检测，确定目的基因 能包装 病毒大量包装 利用 QPCR 检测大量包装最后滴度利用 Westernblot 检测基因表达情况 带感染目的细胞，制备混合克隆细胞株 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/d96830518d9951e79b89680203d8ce2f00666513.html