蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制作以及神经动作电位观察及传导速度测定 一：实验目的 1、 掌握蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法 2、 掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备 3、 掌握测定神经动作电位传导速度的原理与方法 二：实验材料 1、 材料：蟾蜍 2、 器材：常用手术器械（毁髓针、手术镊、手术剪、骨钳、玻璃分针、图钉、蛙板、不锈钢盘）、污物缸、信号采集处理系统、神经屏蔽盒 3、 试剂：任氏液 三：实验方法与步骤 1、 蟾蜍的双毁髓 一只手握住蟾蜍，拇指按住其背部，食指压住其头部；另一只手捏住其嘴部将其头部上下轻轻扳动，找到第一道折痕，其中部即为枕骨大孔，用毁髓针垂直插入枕骨大孔；然后将针尖向前刺入颅腔并搅动以捣毁脑组织，此时的蛙为单毁髓动物；再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方与脊柱平行刺入椎管，捣毁脊髓，彻底捣毁脊髓时可看到蟾蜍的后肢突然蹬直而后瘫软，此时的动物为双毁髓动物。 注意：a、若毁髓后蟾蜍的四肢肌肉紧张或活动自如，需重新毁髓； b、操作要快、准，且操作过程中不要挤压到蟾蜍的耳后腺，避免其分泌蟾酥。 2、 坐骨神经-腓肠肌标本的制作 （1）剥离后肢标本。将蟾蜍背面向上置于蛙板上，用手术镊轻轻提起两前肢间的背部皮肤，用手术剪横向环形剪开皮肤，将蟾蜍身体下半部的皮肤剥离。将蟾蜍剖腹，内脏向头部方向掀起，用骨钳在其第三节脊椎骨处剪断脊柱，然后用手术剪剪断相连的肌肉组织。 （2）分离两后肢。用左手托起标本，拇指和食指固定住两后肢的肌肉，右手持骨钳剪断耻骨，手术剪剪开肌肉连接；纵向剪开脊柱使两后肢完全分离。一只放入任氏液中备用，另一只用于继续下一步操作。 注意：在分离两后肢时需谨慎，不要使剪刀偏离中线太远以免损伤神经。 （3）分离坐骨神经。将后置的脊柱端腹面向上，趾端想外侧翻转，使其足底向上，用图钉将其固定在蛙板上。用玻璃分针沿脊神经向后分离坐骨神经。股部沿肱二头肌和半膜肌之间的裂缝找到坐骨神经，用镊子和手术剪仔细去除半膜肌和肱二头肌，使神经暴露出来。用玻璃分针轻轻挑起神经，自前向后剪断支配腓肠肌之外的分支，并去除神经上的其它组织。取下脊柱端的图钉，保留神经发出部位的一小块脊椎，剪掉其余部分的脊椎及肌肉。 （4）游离腓肠肌。用玻璃分针轻轻游离腓肠肌，并在腓肠肌跟腱下面穿线，用镊子将线打结。 （5）分离股骨头。一手捏住股骨，沿膝关节剪去股骨周围的肌肉，并向前刮干净一小段股骨，保留约1cm的股骨头并剪断股骨。提起结线，剪去膝关节以下的后肢，仅保留腓肠肌与股骨的联系。 （6）检验标本。用手术镊轻轻提起标本的脊椎片，使神经离开蛙板，用经任氏液沾湿的铜锌弓的两极接触神经，如腓肠肌发生迅速收缩，则表示标本机能正常。 注意：在整个标本的制作过程中都要注意不要损伤神经并且经常滴加任氏液保持神经的正常机能。 3、 神经动作电位传导速度的测定 （1）将制作好的坐骨神经-腓肠肌标本置于屏蔽盒内，神经干的中枢端置于刺激电极一侧，将保留的1cm的股骨固定在另一侧，神经干要与电极保持接触；用玻璃分针蘸取任氏液涂在神经干上，不要使两电极间有液体以免发生短路。 （2）将神经屏蔽盒与信号采集处理系统连接，屏蔽盒的地线良好接地，。 （3）打开生理采集系统PcLab，在“设置”的“采样条件设置”下，“显示模式”选择“记忆示波”，“采样间隔”为“50μs”,“采样窗口”为对应接线的通道，最后在“设置”下调整零点。 （4）刺激参数的设置。刺激模式为“单刺激”，延时1ms。 （5）点击“刺激”，在屏幕上将显示出一个神经干动作电位图，选中动作电位最大幅值及之前的部分，测定其时间间隔；将引导电极平移换接到另一对电极上，再次刺激，同样测定最大幅值及之前部分的时间间隔，根据时间差以及两对电极之间的相对距离，计算蟾蜍坐骨神经动作电位的传导速度。 四：实验结果与分析 1、计算动作电位的传导速度： 两次刺激得到的神经干动作电位图中，从开始到动作电位的最大幅值时间间隔分别为1.8ms和2.3ms，得到两次刺激动作电位到达最大幅值的时间差为0.5ms，由于两对电极之间的距离为1cm，因此计算蟾蜍坐骨神经动作电位的传导速度为20m/s。 2、动作电位图示： 3、延时的作用：主要是用来调节图像的位置，可以通过调节它使得记录到的波形位于最佳位置。 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/de2bdc48fc4ffe473368ab9d.html