选修3 现代生物科技专题 知识点 专题1 基因工程 基因工程的概念 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。 概念分析 ①基因工程技术的原理=基因重组 ②目的：创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 ③操作水平：DNA分子水平 属于有性生殖 （一）基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端（回文结构特点）。 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。 ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。 ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 ④大小合适，具有一定的安全性。 （2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 （3）其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒 4．在进行基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改选的。 (二)基因工程的基本操作程序 步骤：目的基因的获取，基因表达载体的构建，将目的基因导入受体细胞，目的基因的检测与鉴定 第一步：目的基因的获取 1.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。 1 2.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 3.PCR技术扩增目的基因 （1）PCR是聚合酶链性反应的缩写，发明人：穆里斯等人 原理：DNA双链复制 实质：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 （2）过程：第一步：（变性）加热至90～95℃DNA解链；第二步：（复性）冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链；第三步：（延伸）加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。 PCR利用DNAR 热变性原理，PCR扩增仪实质上是一台能够自动调控调控的仪器。 4，获取目的基因的方法：从自然界中已有的特种中分离及人工合成。 第二步：基因表达载体的构建 1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端。 （3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。 第三步：将目的基因导入受体细胞_ 1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2.常用的转化方法： 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是 农杆菌转化法，其次还有 基因枪法和 花粉管通道法等。 将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵（也可以是卵细胞）。 将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 ，最常用的原核细胞是 大肠杆菌 ，其转化方法是：先用 Ca2+ 处理细胞，使其成为 感受态细胞 ，再将 重组表达载体DNA分子 溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。 3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。 第四步：目的基因的检测和表达 1.首先要检测 转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。 基因探针：是指用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子 2.其次还要检测 目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用 用标记的目的基因作探针与mRNA杂交。 3.最后检测 目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取 蛋白质，用相应的 抗体进行抗原－抗体杂交。 4.有时还需进行 个体生物学水平的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。 （三）基因工程的应用 1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物，利用转基因改良植物的品质。 ①抗虫棉，抗盐碱地的农作物，耐寒的番茄，抗除草剂的玉米， ②富含赖氨酸的转基因玉米 2 2.动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。 ①③④导入人的生长激素的鲤鱼，比一般的鲤鱼长的快且大。 ②用转基因动物生产药物：乳腺生物反应器（乳房生物反应器） 最令人兴奋的是利用基因工程技术，使哺乳动物本身变成“批量生产药物的工厂” 大概过程：目的基因（蛋白基因+乳腺蛋白基因的启动子） 显微注射方法 导入哺乳动物受精卵 母体子宫内 能产生药品蛋白质转基因动物 能产生如：抗凝血酶，血清白蛋白，生长激素，抗胰蛋白酶，等大量蛋白质类药品。 3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。 基因诊断：是指用基因探针，利用DAN分子杂交原理，鉴定被检测样本上的遗传信息，从而达到检测病症的目的，如镰刀形贫血症，苯丙酮尿症，癌症 基因治疗：基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗病症的目的，这是治疗遗传病的最有效的手段。 基因治疗包括：体外基因治疗和体内基因治疗 微生物的基因工程： 利用转基因工程菌生产药物：如细胞因子，抗体，疫苗，激素（胰岛素），干扰素等，已形成工业化。 工程菌：用基因工程的方法，使外源基因得到高效率表达的菌类细胞株系一般称为工程菌。 转基因动物作器官移植的供体：最大的难题是解决免疫排斥问题 （四）微生物在基因工程中的应用研究 工具酶主要来自微生物， 最重要的目的基因供体库之一， 目的基因的载体之一 作用受体细胞， 提供用于发酵的工程菌。 基因工程的优点：克服不同生物远缘杂交的障碍。目的性强，能够定向的改变生物的品质。 缩短育种周期。 （五）蛋白质工程的概念 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。（基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质） 转录 翻译 专题2 细胞工程 细胞工程：是指导应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术， 根据操作对象不同分为：植物细胞工程，动物细胞工程 操作水平：细胞水平的操作 （一）植物细胞工程 （属于无性繁殖） 无性繁殖最大优点：保持优良品种的遗传特征。 3 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/fc363614a76e58fafab003dd.html