. .. . . 人类X染色质标本的制备与观察 张皓予 15335203 一、实验目的 1.掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。 2.正确识别巴氏小体的特征及其所在位置。 3.说明人体细胞中核内X染色体的数目和性染色体数目之间存在的关系。 二、实验原理 X染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出。用苯酚品红改良染液染色后，便可观察到染色较浓，多位于核膜内侧缘，呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形，直径约1μm大小的小体。女性细胞核中出现率为40%~60%。 Barr和Bertram首先（1949）在雌性猫的神经细胞核中发现，在多数核中部有一个小的深染的小体，而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体，此后许多人的研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类和灵长类等动物的多数组织细胞中存在，而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。这种染色质小体现在称为“性染色质”(sex chromatin)，或称为“巴氏小体”(Barr body)。这种小体常位于核膜的内表面，呈Feulgen阳性反应，表明是DNA的成分，有证据表明，性染色质的存在是由于在雌性哺乳动物核中存在两个X染色体，其中一个X染色体处于失活状态。雄性个体只有一个X染色体。因此原则上男性不应有性染色质。但如果一个男人有XXY染色体，那就会有一个性染色质，虽然表现为男性。同样，XXX的三体应当有两个巴氏小体。因此，性染色质实质上是一个失活的X染色体。为什么失活的X染色体会以巴氏小体的形式显示出来?目前，已有许多证据证明，在雌性个体中那根失活的X染色体已经异染质化，成为功能性异染质。使用放射自显影的方法已经证明，失活的X染色体的固缩周期与其它染色体是不同步的，它在S期是晚复制的。此外，人们也已发现，晚复制的这根X染色体常位于核的边缘，这个位置也正好是巴氏小体出现的位置。 三、实验仪器与试剂 1.仪器与用具 显微镜，水浴锅，牙签，载玻片，盖玻片，镊子，吸水纸。 2.试剂 95%乙醇，1mol/L盐酸，改良苯酚品红染色液 四、实验材料 男性和女性人体口腔黏膜细胞。 五、实验步骤 1.受检者用水漱口，用牙签刮取受检者口腔颊部黏膜，把第一次刮取物弃去，然后再次用牙签刮取黏膜，将第二次刮取物均匀涂布到干净的载玻片上，晾干。 2.将涂片放入95%的乙醇中固定20min，取出晾干。 3.将涂片放入1M HCl中37摄氏度下水解20min，取出后自来水缓缓冲洗。 4.用改良品红染液染色8min，不干燥，轻轻盖上盖玻片，用吸水纸盖住轻轻压片。 5.镜检，从低倍镜到高倍镜依次观察。 六、实验结果 . . . w . .. . . 图1、2、3 女性口腔上皮细胞被染色的细胞核与巴氏小体（箭头） 图4 男性口腔上皮细胞被染色的细胞核 如图1、2所示，可在染成淡紫色的女性上皮细胞细胞核的边缘较清楚地观察到一颗染色较深的小体，即巴氏小体。图3右下角的有一不明显的深色斑块，可能是巴氏小体。 图4为染成紫色的男性上皮细胞细胞核，没有观察到明显的巴氏小体。 经观察男性、女性细胞个五十个发现：50个女性细胞有21个有巴氏小体，占42%；50个男性细胞有0个有巴氏小体。 . . . w 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/25a96ae08aeb172ded630b1c59eef8c75fbf95fa.html