第十二章 生化实验技术 一、选择题 1、某蛋白质pI为7.5，在pH6.0的缓冲液中进行自由界面电泳，其泳动方向为（ ）。 A、向负极移动 B、向正极移动 C、不运动 D、同时向正极和负极移动 2、进行酶活力测定时（ ）。 A、底物浓度必须极大于酶浓度 B、酶浓度必须极大于底物浓度 C、酶能提高反应的平衡点 D、与底物浓度无关 3、不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳比一般电泳的分辨率高，是因为具有下列（ ）效应 。 A、浓缩效应 B、电荷效应 C、分子筛效应 D、粘度效应 4、分离鉴定氨基酸的纸层析属于（ ）。 A、亲和层析 B、吸附层析 C、离子交换层析 D、分配层析 5、SDS-PAGE分离蛋白质的基础是（ ）。 A、分子量 B、荷/质比 C、带负电荷的侧链 D、带正电荷的侧链 6、寡聚蛋白的亚基的相对分子质量可以通过（ ）方法测定。 A、SDS-PAGE B、SDS-PAGE与凝胶过滤结合 C、凝胶过滤 D、SDS-PAGE与等电聚焦结合 7、将抗体固定在层析柱的载体上，使抗原从流经此柱的蛋白样品中分离出来，这种技术属于（ ）。 A、吸附层析 B、离子交换层析 C、亲和层析 D、凝胶过滤 8、将RNA转移到硝基纤维素膜上的技术叫（ ）。 A、Southern印迹 B、Northern印迹 C、Western印迹 D、Eastern印迹 9、在酶的分离纯化中最理想的实验结果是（ ）。 A、纯化倍数高，回收率高 B、蛋白回收率高 C、回收率小但纯化倍数高 D、比活力最大 10、酶的分离提纯过程中，不正确的操作是（ ）。 A、需在低温下进行，一般在0～5℃之间 B、酶制剂制成干粉后可保存于4℃冰箱中 C、需经常使用巯基乙醇以防止酶蛋白二硫键发生还原 D、提纯时间尽量短 二、是非题（在题后括号内打√或×） 1、蛋白质在小于等电点的pH溶液中，向阳极移动，而在大于等电点的pH溶液中，将向阴极移动。 2、酶的比活力可表示酶纯度。 3、提纯酶时，只需求其总活力，就可以知其纯度是否提高了。 4、疏水氨基酸多的蛋白质不溶于水。 5、凝胶过滤和SDS-PAGE测得的蛋白质的相对分子质量是真实相对分子质量。 6、同工酶往往具有相同的电泳迁移率。 7、Southern印迹法，Northern印迹法和Western印迹法是分别用于研究DNA，RNA和蛋白质转移的有关技术。 8、酶活力的测定实际上就是酶的定量测定。 9、由1g粗酶制剂经纯化后得到10mg电泳纯的酶制剂，那么酶的比活力较原来提高100倍。 10、胃蛋白酶的等电点是1.0～2.5，细胞色素c的等电点是9.8～10，用阴离子交换剂分离这两种蛋白质时，首先洗脱的是细胞色素c。 三、问答题 1、盐析法沉淀蛋白质时，往往需要将pH调到蛋白质等电点附近，为什么？ 2、试分别阐述分配层析和吸附层析法分离鉴定氨基酸的原理和操作步骤。 3、以DNA的分离纯化为例，阐述生物大分子分离纯化的基本原则原理和注意事项。 4、电泳现象的产生与蛋白质的分子结构有何关系？ 5、在pH6.5的谷氨酸和丙酮酸混合液中，加入适量的新鲜猪肝匀浆后于37℃水浴中保温30分钟，煮沸后蛋白质沉淀，将上清液点在层析滤纸上，用酚水饱和液进行层析，层析结束后用茚三酮显色出现两条带，这两条带各是什么物质，说明原因。 6、聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么特点？试述聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质的基本原理和主要操作步骤。 7、试比较核酸测序和蛋白质测序在方法策略上的异同。 8、什么叫酶的活力和比活力？测定酶活力时应注意什么？为什么测定酶活力时以测定初速度为宜，并且底物浓度远远大于酶浓度？ 9、什么是Western印迹？它与Southern印迹有什么不同？ 10、影响电泳迁移率的主要因素有那些？ 四、名词解释 吸附层析 分配层析 分子筛层析 离子交换层析 亲和层析 Rf值 浓缩效应 SDS-PAGE 盐析 透析 酶的回收率 双缩脲反应 酶工程 原位菌落杂交 参考答案 一、选择题 1. A 2..A 3.A 4.D 5.A 6. B 7.C 8.B 9.A 10.C 二、是非题 1.× 2..√ 3.× 4.× 5.× 6.× 7.√ 8.√ 9.× 10.√ 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/4362eb22192e45361066f543.html