考马斯亮蓝G-250与R-250的区别 ——整理至网络 SDS-PAGE实验应该用R250 考马斯亮蓝有G250和R250两种，在颜色索引（Colour Index）中给出了不同的编号（42655和42660）。亮蓝G和亮蓝R在冷水中分别为微溶和不溶，在热水和乙醇中分别为可溶和微溶。两种染料均能对固定的蛋白进行有效地染色，使用浓度为溶于甲醇:冰醋酸:水（50:10:40）的0.05%溶液。考马斯亮蓝G250与蛋白质的结合反应十分迅速，是常用的蛋白染料，染色后为蓝绿色，常用来作为蛋白质含量的定量测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质结合虽然比较缓慢，但是染料可以穿透凝胶，染胶效果好，染色后为红蓝色，且可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。G250也可染胶，但染色过程慢且染色后背景高，脱色困难。 图为G250分子结构式，除去红色显示的两个甲基即为R250分子结构 考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R-250）为三苯基甲烷(triphenylmethane)，每个分子含有两个SO3-H基团，本身偏酸性，磺酸基与蛋白质的碱性基团结合形成染料-蛋白质复合物。MW=824，λmax=560-590nm。考马斯亮蓝R-250是通过范德瓦尔键与蛋白质结合，尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色，染色灵敏度比氨基黑高5倍。它与不同蛋白质结合呈现出基本相同的颜色，并且在比较宽的范围内（15-20g），扫描峰的面积与蛋白量呈线性关系。但蛋白质浓度超出一定范围时，对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律，用作定量分析时要注意这点。 考马斯亮蓝G250（Coomassie brilliant blue G-250）为二甲花青亮蓝(xylene cyanine brilliant blue)，是一种甲基取代的三苯基甲烷。比考马斯亮蓝R250多二个甲基，MW=854；λmax=590-610nm，游离状态下呈红色。染色灵敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。其优点在于它在三氯乙酸中不溶而以胶体形式存在，能选择性地和蛋白质形成复合物，染色迅速，着色深的蛋白质区带在数秒内即可显现出来，约45分钟后着色最深，本底低，重复性好，适用于定量分析。 考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/c21ba0e7eff9aef8951e0608.html