食品微生物学检验 β型溶血性链球菌检验方法确认报告 1. 方法依据 本方法依据标准GB 4789.11-2014《食品安全国家标准 食品微生物学检验 β型溶血性链球菌检验》。 2. 方法原理 根据β型溶血性链球菌的菌落特性，在特定的选择性琼脂平板上有特殊的菌落形态，经过增菌、分离、生化试验报告样品中检出或未检出β型溶血性链球菌。 3. 主要仪器和试剂 3.1 仪器。 3.1.1显微镜 3.1.2高压灭菌器。 3.1.3微量移液器。 3.1.4恒温培养箱。 3.1.5菌落计数器。 3.1.6电子天平。 3.1.7 均质器。 3.1.8 振荡器。 3.2试剂。 3.2.1 改良胰蛋白胨大豆肉汤 3.2.2 哥伦比亚CAN血琼脂 3.2.3 哥伦比亚血琼脂 3.2.4 革兰氏染色液 3.2.5 胰蛋白胨大豆肉汤 3.2.6 3%过氧化氢溶液 3.2.7 生化鉴定试剂盒 4. 实验步骤 4.1 样品处理及增菌 按无菌操作称取检样25 g （mL），加入盛有225 mL mTSB 的均质袋中，用拍击式均质器 -1- 均质1 min～2 min。若样品为液态，振荡均匀即可。36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。 4.2 分离 将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，36 ℃±1 ℃厌氧培养18 h～24 h，观察菌落形态。 溶血性链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2 mm～3 mm，灰白色、半透明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。 4.3 鉴定 4.3.1 分纯培养 挑取5个（如小于5个则全选） 可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB 增菌液， 36 ℃±1 ℃，培养18 h～24 h。 4.3.2 革兰氏染色镜检 挑取可疑菌落染色镜检。β 型溶血性链球菌为革兰氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。 4.3.3 触酶试验 挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β 型溶血性链球菌触酶为阴性。 4.3.5 其他检验 使用生化鉴定试剂盒对可疑菌落进行鉴定。 5. 计数方法 综合试验结果，报告每25 g（mL）样品中检出或未检出β型溶血性链球菌。 6. 结果与讨论 6.1本实验室于2016年8月，对样品分析编号为B160805-07的黄酒中β型溶血性链球菌参照本法测定，测定结果如下： mTSB 36 ℃ 2016.08.05 日 15:25 ：起 2016.08.06 日 15:30 ：止 哥伦比亚CNA血琼脂平板 ℃ 厌氧 日 ：起 日 ：止 哥伦比亚血琼脂平板 ℃ 日 ：起 样品 阳性对照 灰白色半透明菌落 有β型溶血 阴性对照 无菌落生长 无菌落生长 / / / -2- 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/cbf7f06ecf1755270722192e453610661ed95a22.html