1、EDAC和EDC好像是同一个东西，不是差不多。 2、pH=5最好用缓冲溶液来调，MES。 如果不能用缓冲溶液，就先调好，再加，不然调来调去的就分解了。毕竟EDC用量少，对pH影响小。 3、EDC是活化COOH的，所以理论上讲应该是先和COOH组分混合，反应10-15min后再加入NH2组分。如果你的体系简单，可以一起加（A分子含COOH，B分子含NH2），如果是蛋白或者氨基酸的反应，有副反应的，最好先和COOH组分反应。 4、EDC反应的中间产物不稳定，最好用sulfo-NHS活化，经典组合。NHS据说水溶性不好。 5、如果没有sulfo-NHS，文献上也有用NHS在水里面做的，我没做过，不知是否可靠。不过有替代方法，就是COOH在有机溶剂中DCC催化和NHS先反应，纯化后水溶液直接和NH2反应。不需要EDC了。 6、EDC可以配成溶液，也可以粉末直接加，就怕你秤不准。 为了提高 酰胺键的 转化率 EDC 一定要过量，过量到什么程度，好像没有你说的1000：1那么高的，我看过几篇文献里用到EDC的 36：1是最大的，用量少的 1.2：1，但是用量少的一般都是和NHS一起用的，而且是在 ph 5 左右的缓冲溶液里。 如果你的反应物都溶于水，建议用 EDC,NHS in MES buffer ph-5.2~5.5，如果你的反应物有不溶于水的，只能用有机溶剂作为反应介质，建议你只用EDC 试一试，最好不要用DCC，因为副产物真地很难除净，如果实在没办法了，再用DCC,NHS 试试吧。 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/e0ef7f0b2c60ddccda38376baf1ffc4ffe47e2b7.html