半合成-酶连法克隆EFsec基因及其初步表达分析 李丽;朱贵明;汪坤福;张鹏霞 【期刊名称】《中国老年学杂志》 【年(卷),期】2012(32)9 【摘 要】目的 将缺失一段编码序列的真核硒代半胱氨酸tRNA特异性延伸因子(EFsec)基因补齐,并克隆到真核表达载体进行初步表达分析.方法 采用人工合成法合成所缺失的基因片段,然后利用EFsec-基因序列中靠近5′端存在的天然酶切位点进行酶连,再用PCR方法扩增出拼接产物,并将其克隆到pcDNA3 1(-)载体.采用脂质体转染法转染HEK293T细胞后应用RT-PCR法检测EFsec基因的表达.结果 准确快捷地将EFsec基因补齐了其5′端缺失的基因序列,并成功地构建了其表达质粒pcDNA3.1-EFte,转染哺乳动物细胞后检测到了 EFsec基因的显著表达.结论 半合成-酶连法可以高效快捷地朴齐并克隆缺失的EFsec-基因,提供了一种拼接基因的有效策略和方法,同时也为EFsec基因的下一步研究奠定了基础. 【总页数】3页(P1868-1870) 【作 者】李丽;朱贵明;汪坤福;张鹏霞 【作者单位】佳木斯大学,黑龙江佳木斯154007;佳木斯大学,黑龙江佳木斯154007;佳木斯大学,黑龙江佳木斯154007;佳木斯大学,黑龙江佳木斯154007 【正文语种】中 文 【中图分类】R285;Q255 【相关文献】 1.红麻查尔酮合成酶及其异构酶基因的克隆与表达分析 [J], 余明丽;陈鹏;黄志鹏;邱爱华;周瑞阳 2.红麻查尔酮合成酶及其异构酶基因的克隆与表达分析 [J], 余明丽;陈鹏;黄志鹏;邱爱华;周瑞阳; 3.蓝粒小麦花青素合成途径中的查尔酮合酶基因和类黄酮3′5′-羟化酶基因3′末端的克隆和表达分析 [J], 杨国华;李滨;高建伟;刘建中;赵学强;郑琪;童依平;李振声 4.紫参薯查尔酮合成酶及异构酶基因的克隆与表达分析 [J], 赵景梅;黄东益;张青;许云 5.荸荠淀粉合成酶AGPase的基因克隆及表达分析 [J], 董伟清;江文;何芳练;邱祖杨;蒋慧萍;黄诗宇;刘莉莉;何春红;杨干德 因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/e592f0387cd5360cba1aa8114431b90d6c85892c.html